产品详情
  • 产品名称:RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液(强)

  • 产品型号:FS1001
  • 产品厂商:FuShen
  • 产品价格:180
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简单介绍:
RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液(强) 的多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,例如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(强)(Enhanced RIPA Lysis Buffer ),是采用一种经典的细胞组织快速裂解,并获得总蛋白的裂解液RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液(强)
详情介绍:

RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液(强)

产品信息

产品货号 产品名称 规格 价格(元)
FS1001-100ML     RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液(强)      100ml       180.00 
FS1002-100ML RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液(中) 100ml 180.00 
FS1003-100ML RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液(弱) 100ml 180.00 

Enhanced RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP40、sodium deoxycholate等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,例如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(强)(Enhanced RIPA Lysis Buffer ),是采用一种经典的细胞组织快速裂解,并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(中)。所获得的蛋白质可以用于Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)等。

产品组成:

                       编号

名称

PS0013

Storage

Enhanced RIPA Lysis Buffer             

     100ml              

-20℃               

PMSF(100mM)

1.5ml

-20℃

使用说明书

1份


操作步骤(仅供参考):

(一)贴壁培养细胞

1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM。

2、 去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。

3、 按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解15~30min,通常裂解液作用于细胞1~3秒内,细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。

4、 10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞

1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM。

2、 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。

3、 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Enhanced RIPA Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

4、 10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)组织样本

1、 取Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM。

2、 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。

3、 按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15-30min。

4、 步骤3、4亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Enhanced RIPA Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。

5、 10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

6、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项:

去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。

如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。

溶解Fushen RIPA Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免有效成分失效。

裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-KB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。有效期: 12个月有效。

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