产品详情
  • 产品名称:Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

  • 产品型号:FS1004-100ML
  • 产品厂商:FuShen
  • 产品价格:180
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简单介绍:
Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X-100, 低浓度sodium pyrophosphate等组成,不含蛋白酶、磷酸酶抑制剂,并维持原有的蛋白间相互作用。​ Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液
详情介绍:

Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

产品信息

产品货号 产品名称 规格   价格(元)
FS1004-100ML Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 100ml 180.00 
FS1005-100ML NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液 100ml 180.00 
FS1006-100ML SDS Lysis Buffer SDS裂解液 100ml 180.00 
FS1007-100ML RIPA Lysis Buffer (Strong) (Without Enzyme Inhibitors) RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 100ml 180.00 
FS1008-100ML Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enzyme Inhibitors)  免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 100ml 180.00 

用Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors)得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。

是多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,如Triton、SDS、NP-40等,Western及IP细胞裂解液是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞,并获得总蛋白的裂解液。Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X-100, 低浓度sodium pyrophosphate等组成,不含蛋白酶、磷酸酶抑制剂,并维持原有的蛋白间相互作用。


产品组成:

                           编号

名称

FS1004      

Storage

免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液        

100ml

-20℃

使用说明书

1份 


操作步骤(仅供参考):

(一)贴壁培养细胞

取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。

去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。

按照6孔板每孔加入100~200μl裂解液的比例,加入Western及IP细胞裂解液。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞1~5s内,细胞就会被裂解。

10000~12000g,离心3~5min(如果用冷冻离心机4℃离心效果更佳),取上清。

进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞

1、 取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。

2、 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。

3、 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入100~200μl裂解液的比例,加入Western及IP细胞裂解液。通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150~200μl,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

4、 10000~12000g,4℃离心3~5min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀等操作。

(三)组织样本

1、 取Western及IP细胞裂解液置于室温溶解混匀,根据实验需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。

2、 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。

3、 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。

4、 按照每20mg组织加入100~200μl裂解液的比例,加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30~60min。

5、 步骤3、4亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入100~200μl裂解液的比例加入Western及IP细胞裂解液。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。

6、 按照每20mg组织加入100~200μl裂解液的比例,加入Western及IP细胞裂解液。

7、 10000~12000g,4℃离心10~15min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

8、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

注意事项:

去除贴壁细胞的培养液时,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。

如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

溶解FuShenCell lysis buffer for Western and IP时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。

细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。有效期: 12个月有效。


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