产品详情
  • 产品名称:SDS Lysis Buffer SDS裂解液

  • 产品型号:FS1006-100ML
  • 产品厂商:FuShen
  • 产品价格:180
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简单介绍:
SDS Lysis Buffer SDS裂解液是一种极其强烈的细胞组织快速裂解液并获得总蛋白质。其裂解液强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA裂解液(中)、通用细胞裂解液、Western及IP细胞裂解液,SDS Lysis Buffer SDS裂解液所获得的蛋白质可以用于Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等。
详情介绍:

SDS Lysis Buffer SDS裂解液

产品信息

产品货号 产品名称 规格   价格(元)
FS1006-100ML SDS Lysis Buffer SDS裂解液 100ml 180.00 
FS1007-100ML RIPA Lysis Buffer (Strong) (Without Enzyme Inhibitors) RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 100ml 180.00 
FS1008-100ML Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enzyme Inhibitors)  免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 100ml 180.00 

SDS Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、SDS等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

SDS Lysis Buffer SDS裂解液是一种极其强烈的细胞组织快速裂解液并获得总蛋白质。其裂解液强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA裂解液(中)、通用细胞裂解液、Western及IP细胞裂解液,SDS Lysis Buffer SDS裂解液所获得的蛋白质可以用于Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等。

产品组成:

                  编号

名称

FS1006

Storage

SDS Lysis Buffer

100ml

-20℃

PMSF(100mM)

1.5ml

-20℃

使用说明书

1份

 操作步骤(仅供参考)

(一)贴壁培养细胞

SDS Lysis Buffe室温溶解混匀,使用前取适量裂解液加入PMSF,使终浓度为1mM。

去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。

按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例加入SDS Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞1~3s内,细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃裂解15~30min。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。

10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

(二)悬浮培养细胞

SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀后,使用前取适量裂解液加入PMSF,使其*终浓度为1mM。

低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。

用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。通常裂解液作用于细胞1~3s内,细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 置于冰上或4℃裂解15~30min。

10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

(三)组织样本

SDS Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,使用前取适量裂解液加入PMSF,使其*终浓度为1mM。

把组织剪切成细小的碎片,越小越好。

取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。

20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。如果是所提蛋白样品用于CHIP,置于冰上或4℃继续裂解10~20min。

步骤3、4亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的SDS Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,过程尽量控制在1~2min之内, 以减少蛋白的降解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃继续裂解10~20min。

10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。 

注意事项:

去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。

如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/离心管,然后再裂解。少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

溶解SDS Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。

细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。有效期: 12个月有效。

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