产品详情
  • 产品名称:BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

  • 产品型号:FS1026
  • 产品厂商:FuShen
  • 产品价格:280
  • 产品文档:
  • 我要买: 加入购物车
你添加了1件商品 查看购物车
简单介绍:
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)BCA(Bicinchoninic acid)法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应,即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,产生一种紫蓝色复合物,在562nm处有高的吸光值,该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
详情介绍:

BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

产品信息

产品编号

产品名称

规格

价格(元)

FS1026-500T

BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

500T

280.00

FS1026-2500T

BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

2500T

800.00

FS1026-5000T

BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

5000T

1500.00

产品描述

BCABicinchoninic acid)法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应,即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,产生一种紫蓝色复合物,在562nm处有高的吸光值,该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。

BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测,也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量(100μl)的蛋白样品,但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20v/v),从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便,仅需少量(10-25μl)的蛋白样品。不过,由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8v/v),某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低*低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒,比色皿法分别可做50次,250次,500次。酶标法分别可做500次,2500次,以及5000次。

产品特点

1)    灵敏度高,*小检测蛋白量可达0.2μg,检测浓度下限达到10μg/ml

2)    速度快,比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。

3)    线性范围广,20-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。

4)    不受大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中5%SDS5%Triton X-1005%Tween 206080等。(详情见附录

室温运输。试剂盒室温保存即可,其中短期不用的蛋白标准品(BSA)也可放到4 ºC保存。有效期12个月。

注意事项

1)    使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,因此需注意保持定时和定温,以确保**定量。

2)    低温或长期保存,若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现**污染,则应丢弃,避免对实验结果造成影响。

3)    实验操作规范,提高上样量的**度。

4)    每次测定都需做相应的标准曲线,因为显色反应与温度和时间的变化有关,精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。

操作方法

一、配制标准品和工作液

1. 配制BSA标准品体系

注:标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%NaCl1×PBS进行稀释。

BSA标准品体系配制可参考表一。

表一BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围20-2000μg/ml*

Vial

稀释液体积(μl)

2mg/ml BSA体积(μl)

BSA终浓度(μg/ml)

A

0

100

2000

B

25

75

1500

C

50

50

1000

D

125

75

750

E

150

50

500

F

350

50

250

G

375

25

125

H

395

5

25

I

400

0

0=Blank

*如用比色皿检测,每管需加100μl标准品,按3个重复计算,每个浓度至少需配制300μl

2. 配制BCA工作液

1)    计算所需要的总BCA工作液体积。

BCA工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA工作液

注:比色皿检测时每个样品加2.0ml BCA工作液,微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。

2)    配制BCA工作液:50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂BA:B=50:1 ,充分混匀。

注:BCA试剂B加入BCA试剂A中后,迅速浑浊,通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内,室温条件24h稳定。

二、检测方法

1. 比色皿检测方法(样品:BCA工作液=1:20

1)    各取100μl标准品和待测样品加入到反应管中。

2)    每管加入2.0ml BCA工作液,混匀。37孵育30min

注意:也可室温孵育2h,或者60℃孵育30minBCA检测蛋白浓度,延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限,以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低,可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。

3)    冷却到室温。在分光光度计上进行检测,设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在10分钟内对所有样品读数。

注意由于BCA反应达不到真正的反应终点,即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是,由于室温下生色比率相当低,因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试,不会导致明显错误。

4)    根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即*终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/mlY-*终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法(样品:BCA工作液=1:8

1)    各取25μl标准品和待测样品加入到微孔板中。

注:样品与工作液比例为1:8,若样品有限,可使用10μl标准品和待检测样品进行检测(即1:20),这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml

2)    每孔加入200μl BCA工作液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,37孵育30min

3)    冷却到室温,在酶标仪上的540595nm波长范围处检测吸光度,其中562nm波长为*佳。

注意:a)由于酶标板的光径比比色皿短,使得酶标板检测需要更好的样品:BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长,建议延长孵育时间到2hb)延长孵育时间或者提高样品:BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值,并且降低检测下限和工作线性范围。

4)    根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即*终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/mlY-*终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

附录          

表:BCA蛋白浓度测定的兼容性

名称

耐受浓度

Sodium bicarbonate  

100 mM

Sodium phosphate    

25 mM

2-Mercaptoethanol 

0.01%

Glycercol (pure) 

10%

Glycine-HCl, pH 2.8 

100 mM

HEPES 

100 mM

Hydrochloric acid 

100 mM

Leupeptin

10 mg/L

Nickel chloride (in TBS, pH8.0)

10 mM

Nonidet P-40 (NP-40) 

5% (w/v)

Octyl β -glucoside

5% (w/v)

Potassium thiocyanate

3.0 M

SDS  

5%

Sodium acetate, pH 4.8  

200 mM

Sodium azide

0.20%

Sodium hydroxide  

100 mM

Sucrose  

40%

Triton X-100  

5%

Triton X-114, X-305,X-405

1%

Tween-20, Tween-60, Tween-80

5%

Zwittergent

1%

ACES, pH 7.8 

25 mM

Acetone  

10%

Acetonitrile   

10%

Ammonium sulfate  

1.5 mM

Aprotinin

10 mg/L   

Bicine, pH 8.4  

20 Mm

Bis-Tris, pH 6.5   

33 mM

Borate, pH 8.5   

50 mM

Brij-35

5%

Brij-52

1%

Brij-56, Brij-58

1%

BugBuster protein Extraction Reagent (Cat. No. 70584)

no interference (undiluted)

沪公网安备 31010402004520号