产品详情
  • 产品名称:SABC-AP(小鼠/兔IgG)即用型组化试剂盒

  • 产品型号:FSM0132
  • 产品厂商:FuShen
  • 产品价格:780
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简单介绍:
SABC-AP(小鼠/兔IgG)即用型组化试剂盒;SABC免疫组化试剂盒;SABC即StreptAvidin—BiotinComplex;鼠兔通用组化试剂盒;SABC-AP(小鼠/兔IgG)即用型组化试剂盒
详情介绍:
小鼠/兔IgG- SABC-AP即用型组化试剂盒
产品简介
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量47000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—BiotinComplex。根据研究,SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。SABC 兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。

产品组成
FSM0132-1 kit
组成                  名称                                    规格           Storage
试剂A:   5%BSA封闭液 ,                                6ml            +4℃
试剂B: 生物素标记山羊抗小鼠或兔IgG,             6ml            +4℃
试剂C: SABC-AP(碱性磷酸酶标记链酶亲和素),6ml            +4℃
试剂D: BCIP/NBT显色剂(×20),                         0.5ml          +4℃
试剂E: 水溶性封片剂,                                      6ml            +4℃
试剂F: 中性核固红,                                         6ml            +4℃
说明书 1份

使用方法
A.石蜡切片热修复抗原染色程序:
1. 载玻片防脱片剂处理:可选择APES 或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以使切片紧密粘附。
2. 切片常规脱蜡至水。
3. 30%H2O2 1 份+蒸馏水10 份混合,室温5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3 次。
4. 热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10 分钟后,反复1-2 次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2 次。
5. 滴加试剂A:(5%BSA 封闭液)室温20 分钟。甩去多余液体, 【注】千万不要洗。
6. 滴加适当稀释的一抗(小鼠或兔IgG),20-37 ℃ 1~2 小时左右。也可4℃过夜。0.01M TBS(pH9.0-9.5)洗5 分钟×3 次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
7. 滴加试剂B:(生物素化山羊抗小鼠或兔IgG),20-37℃ 20 分钟。0.01M TBS(pH9.0-9.5)洗5分钟×3 次。
8. 滴加试剂C:(SABC-AP),20-37℃ 20 分钟。0.01M TBS(pH9.0-9.5)洗5 分钟×4 次。
9. 显色试剂D:(BCIP/NBT)用0.01M TBS(pH9.0-9.5)按1:20的比例稀释,混匀后加至切片。20-37℃显色10-30分钟,镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
10. 试剂E核固红轻度复染。水洗,干燥后试剂F水溶性封片剂封片(水溶性封片剂应加温至60℃左右)。显微镜观察。

B.血涂片,细胞和冰冻切片染色程序
1.载玻片经防脱片剂处理(Poly-L-Lysine)。抗凝血经分层离心后涂片;培养细胞也可涂片或贴片生长;冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案优选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定30 分钟。
3. 30%H2O2 1 份+纯甲醇50 份混合,室温浸泡30 分钟,以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2 次。其余步骤和石蜡切片5-10 步相同。如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复,方法和石蜡切片4-10 步相同。

注意事项
1. 如果染色背景过高,在SABC 反应之后,BCIP/NBT显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN20 的PBS洗涤切片4 次,单纯PBS 洗2 次,然后DAB 显色。
2. 热修复抗原可选0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS 等多种缓冲液。当降低 DAB 配置浓度(1.5ml 或者 2ml 蒸馏水加显色剂 A, B,C 各1滴)。若显色过慢,可适当提高 DAB 配置浓度(2ml 蒸馏水加显色 剂 A,B,C 各 3 滴) 
3.蒸馏水充分洗涤以终止反应。必要时 Mayor’s 苏木素复染 1-2 分钟左右。水 洗。 
4.脱水,透明,中性树胶封片,显微镜观察。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
6. 用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。

沪公网安备 31010402004520号